方法:土壤或盆栽培養物中AMF孢子的分離提取采用濕篩傾析法。
工具:土壤标準篩(孔徑為上層0.8 mm,中層0.25 mm,下層0.055 mm)、攪拌器。
流程:稱取菌劑或土壤放入攪拌機燒杯中→加水至杯1/3→高速攪拌10~15 s →懸液依次通過3個土壤标準篩→反複沖洗菌劑或土壤直到懸液清澈(大部分粗沙礫殘餘物留在燒杯中)→流水沖洗每層篩子直至流出清水→用洗瓶将篩中的殘餘物輕輕沖洗彙集到篩子的一邊→倒入培養皿中→體式顯微鏡下觀察孢子。
上層篩子(孔徑0.25 mm)一般不做離心處理,因為有很多有機質,經過洗滌、轉移到培養皿中,在體視顯微鏡下觀察。
下層篩(孔徑0.055 mm)中全部殘餘物轉移入100 mL的離心管→加水至離心管的2/3處→ 3000 rpm離心4 min →棄懸浮雜質→上清液轉移到培養皿中→體式顯微鏡下觀察孢子;
離心管中加入45%蔗糖溶液至離心管的2/3處→玻璃棒攪拌均勻→ 3000轉離心1.5 min →蔗糖溶液轉移入孔徑0.055 mm的篩中→反複沖洗掉蔗糖→篩中的殘餘物輕輕沖洗轉移到培養皿中→體式顯微鏡下觀察孢子。
在體視顯微鏡下,用解剖針将孢子與有機無機碎屑分離,最後将孢子按形态分開,用移液器或毛細吸管吸出,放入表面皿中備用,表面皿置于培養皿中以減少蒸發。根據實驗需要進行分類鑒定、純種培養等。
注意:為使土壤完全分散開,對于黏性或結塊較大的土壤,可以先在水中浸泡20~30 min,必要時土樣可以放在六偏磷酸鈉溶液中。