華東地區AMF菌種保藏與研發中心
East China AMF Strain Collection and R&D Center

孢子提取與清洗

方法:土壤或盆栽培養物中AMF孢子的分離提取采用濕篩傾析法。

工具:土壤标準篩(孔徑為上層0.8 mm,中層0.25 mm,下層0.055 mm)、攪拌器。

流程:稱取菌劑或土壤放入攪拌機燒杯中加水至杯1/3高速攪拌10~15 s 懸液依次通過3個土壤标準篩反複沖洗菌劑或土壤直到懸液清澈(大部分粗沙礫殘餘物留在燒杯中)流水沖洗每層篩子直至流出清水用洗瓶将篩中的殘餘物輕輕沖洗彙集到篩子的一邊倒入培養皿中體式顯微鏡下觀察孢子。

上層篩子(孔徑0.25 mm)一般不做離心處理,因為有很多有機質,經過洗滌、轉移到培養皿中,在體視顯微鏡下觀察。

下層篩孔徑0.055 mm中全部殘餘物轉移入100 mL的離心管加水至離心管的2/3處 3000 rpm離心4 min 棄懸浮雜質上清液轉移到培養皿中體式顯微鏡下觀察孢子;

離心管中加入45%蔗糖溶液至離心管的2/3處玻璃棒攪拌均勻 3000轉離心1.5 min 蔗糖溶液轉移入孔徑0.055 mm的篩中反複沖洗掉蔗糖篩中的殘餘物輕輕沖洗轉移到培養皿中體式顯微鏡下觀察孢子。

在體視顯微鏡下,用解剖針将孢子與有機無機碎屑分離,最後将孢子按形态分開,用移液器或毛細吸管吸出,放入表面皿中備用,表面皿置于培養皿中以減少蒸發。根據實驗需要進行分類鑒定、純種培養等。

注意:為使土壤完全分散開,對于黏性或結塊較大的土壤,可以先在水中浸泡20~30 min,必要時土樣可以放在六偏磷酸鈉溶液中。





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