分子生物學鑒定方法

DNA提取：

1. 從純化的培養物篩取孢子，挑出有活力的孢子，用滅菌的蒸餾水洗淨；

2. 将3-20個孢子用移液器轉移到1.5 mL的滅菌離心管底部，使水盡量少，将裝有孢子的離心管置于冰上；

3. 将水浴鍋開到94℃，将Taq聚合酶配套的buffer解凍後置于冰上；

4. 用槍頭将孢子搗碎，使其内容物釋放出來。該過程也要在體視鏡下進行，以便能看到孢子和确保内容物（包含DNA）釋放出來。因為孢子周圍液體很少，因此不會有太多滑動。

5. 将槍頭在離心管底部的壁上邊刮邊拿出來，使得孢子不會被帶出來；

6. 一旦孢子破碎，立即向離心管中加入10 ul冰的Taq聚合酶buffer，立即放入94℃水浴4min使得DNA酶失活；

7. 水浴4 min之後，立即将離心管置于冰上，這個時候DNA可被用于PCR擴增或者保存于-20℃。

參考：https://invam.ku.edu/dna-extraction（裡面有一些圖片）

PCR擴增與克隆測序：

引物使用：

測序結果通過Blast比對。

PCR條件參考文獻：